外泌體提取

外泌體是直徑介于30-150nm的膜性小囊泡。有關外泌體的分離，不同的提取方法各有利弊，不同方法的選擇取決于下游的應用及需要解決的科學問題。國際囊泡協(xié)會（ISEV）在“2018年囊泡研究基本實驗要求（MISEV2018）”中把含外泌體的分離方法分為以下4個層面：（1）高回收率，低特異性：沉淀法、低分子量過濾；（2）中等回收率，中等特異性：超速離心、排阻色譜、高分子量過濾、膜親和柱；（3）低回收率，高特異性：排阻+超濾、免疫捕獲、流式細胞術；（4）高回收率，高特異性：目前不存在，未來可能會有。

翌科生物根據(jù)客戶需求，可提供涵蓋上述所有方法的外泌體提取服務

外泌體鑒定

外泌體染色示蹤

PKH26染色后外泌體與細胞共培

PKH67染色后外泌體與細胞共培

組織外泌體分離

從組織間隙中分離出的外泌體，具有真實性、排他性、豐富性和創(chuàng)造性特征。組織外泌體主要進行腫瘤、腦部疾病、衰老和免疫相關的研究，緊跟國際前沿，且具有重要臨床意義。

腦組織外泌體分離實例

采用消化+超離法從腦組織中分離外泌體：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經(jīng)水浴、反復輕輕上下顛倒，再用移液槍間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。最后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑跟蹤分子（NTA）和marker WB鑒定。

翌科生物提供腫瘤、腦、肝、肺、胃、腎、淋巴、前列腺、心臟、神經(jīng)、脂肪等組織外泌體提取服務

參考文獻

CrescitelliR, et al. Isolation and characterization of extracellularvesicle subpopulations from tissues. Nature Protocols. 2021

流式檢測外泌體蛋白定量

外泌體的檢測技術主要包括電鏡、WB和粒徑分析；缺少精準、簡便、快捷的外泌體定量方法。流式細胞術可以高速分析上萬個顆粒，具有速度快、精度高、準確性好的優(yōu)點，是當代最先進的細胞或微顆粒定量分析技術之一。隨著科技的發(fā)展，新型流式細胞儀經(jīng)過參數(shù)調(diào)試后可適用于檢測低于100nm的微顆粒，極為適用于外泌體定量分析，且已經(jīng)在多篇高水平論文中得以應用。

翌科生物擁有專利保護流式外泌體定量分析技術，是國內(nèi)獨家可提供外泌體流式定量服務的公司

技術原理

應用場景

參考文獻

Nolan et al. Analysis of Individual Extracellular Vesicles by Flow Cytometry. Methods Mol Biol. 2018

Kamerkar et al. Exosomes facilitate therapeutic targeting of oncogenic KRAS in pancreatic cancer. Nature. 2017

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